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質(zhì)粒提取原理及流程

更新時(shí)間:2010-03-08  |  點(diǎn)擊率:7669

質(zhì)粒提取原理及流程:
較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種:堿裂解法、煮沸法和去污劑
(如Triton和SDS)裂解法。前兩種方法比較劇烈,適用于較小的質(zhì)粒
(<15kb)。去污劑裂解法則比較溫和,一般用于分離大質(zhì)粒(>15kb)。
堿裂解法是一種應(yīng)用為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法,其原理
為:染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多,且染色體DNA為線狀分
子,而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子;當(dāng)用堿處理DNA溶液時(shí),
線狀染色體DNA容易發(fā)生變性,共價(jià)閉環(huán)的質(zhì)粒DNA在回到中性
時(shí)即恢復(fù)其天然構(gòu)象;變性染色體DNA片段與變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞
碎片結(jié)合形成沉淀,而復(fù)性的超螺旋質(zhì)粒DNA分子則以溶解狀態(tài)
存在液相中,離心去除沉淀后,就可從上清中回收質(zhì)粒DNA。
目前,市面上質(zhì)粒提取試劑盒大多數(shù)都是采取上述的堿裂解方法,
不同之處在于純化方式。目前比較常用的純化系統(tǒng)是硅基質(zhì)吸附材
料,其原理為在高鹽環(huán)境下質(zhì)粒DNA能夠結(jié)合到硅基質(zhì)上,然后用
低鹽緩沖液或水將質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)上洗脫下來(lái)。得到的質(zhì)粒可以
用于酶切、PCR、測(cè)序、細(xì)菌轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

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