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檸檬酸合酶試劑盒基礎介紹

更新時間:2023-04-21  |  點擊率:2003
  一、檸檬酸合酶(CS)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體基質中,是細胞內多種代謝途徑的關鍵限速酶及代謝變化的標志酶,具有高度底物特異性,僅催化乙酰CoA和草酰乙酸縮合生成檸檬酸和輔酶A,作為三羧酸循環第一個限速酶,是該途徑主要調控位點之一。檸檬酸合酶催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸,DTNB轉變為黃色的TNB,產物在412nm處具有特征吸收峰,根據吸光值變化即可表征檸檬酸合酶的活性。
 
  二、使用前每支加入500µL蒸餾水充分溶解(未使用完的試劑-20℃保存);使用前每支加入1.5mL蒸餾水充分溶解(未使用完的試劑-20℃保存)。測定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計、1mL玻璃比色皿(光徑10mm)、研缽/勻漿器、可調式移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養箱和蒸餾水。
 
  三、推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活,若用樣本質量計算,則需加測胞漿提取物CS活性,上清(胞漿提取物)和沉淀(線粒體)酶活之和即為總酶活;準確在10s和130s處完成讀數,以保證實驗結果的準確性;測定過程中待測樣本和所有試劑須冰上放置,以免變性和失活;計算?A測定=A2測定-A1測定,?A對照=A2對照-A1對照,?A=?A測定-?A對照。




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